基因组DNA体外完全甲基化处理试剂盒

基因组DNA体外完全甲基化（sss1）处理试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

基因组DNA体外完全甲基化（sss1）处理试剂是一种旨在使用CpG甲基转移酶转移来自供体的S－腺苷甲硫氨酸的甲基到基因组DNA或DNA片段里所有CpG岛的胞嘧啶上，体外产生基因组DNA完全甲基化状态的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种基因组DNA和双链DNA片段的甲基化。应用于阻止某些内切酶的作用、甲基化依赖性基因表达等研究。产品严格无菌，即到即用，性能稳定，作用完全。

 

技术背景

 

在人类基因组内，通常存在一些富含重复双核苷酸“CG”的区域，称为“CpG岛”（CpG island），有近3万个。这些CpG岛不仅是基因的一种标志，而且还参与基因表达的调控和影响染色质的结构，更是DNA甲基化的唯一位置。CpG甲基转移酶（M.SssI；42KD）可以使所有CpG岛上的胞嘧啶（cytosine）成为甲基化状态。常用于甲基化分析的阳性对照

 

产品内容

 

反应液（Reagent A）         50微升

补充液（Reagent B）      1.5毫升

萃取液（Reagent C） 1毫升

浓缩液（Reagent D）    500微升

助沉液（Reagent E）      5微升

沉淀液（Reagent F） 3毫升

净化液（Reagent G） 5毫升

保存液（Reagent H） 1毫升

产品说明书           1份

 

保存方式

 

保存在－20℃冰箱里，避免反复冻融； 有效保证3月

 

用户自备

 

1.5毫升离心管：用于反应操作的容器

微型台式离心机：用于核酸纯化操作

恒温水浴：用于反应孵育

 

实验步骤

 

实验开始前，将－20冰箱里的试剂置于冰槽里融化，同时准备2个恒温水浴，分别设置为37℃和65℃。然后进行下列操作。

 

• 准备1个1.5毫升离心管
• 移取10微升反应液（Reagent A）
• 加入1至5微升用户自备的DNA样品（总量可达2微克）
• 加入适量的补充液（Reagent B）到20微升体系，混匀
• 即刻放进37℃恒温水浴孵育2小时（注意：可以孵育4小时）
• 放进65℃恒温水浴孵育15分钟
• 加入200微升补充液（Reagent B）
• 加入200微升萃取液（Reagent C）
• 涡旋震荡15秒
• 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如EPPENDORF 5415）
• 小心移出上层液相溶液到新的1.5毫升离心管，留下25微升相位交界面的溶液
• 加入65微升浓缩液（Reagent D）
• 加入1微升助沉液（Reagent E）
• 加入600微升沉淀液（Reagent F）
• 涡旋震荡15秒
• 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如EPPENDORF 5415）
• 小心抽去上清液
• 加入1毫升净化液（Reagent G）
• 放进微型台式离心机离心15分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽去上清液
• 空气中晾干
• 加入100微升保存液（Reagent H）
• 放进－20℃冰箱长期保存

 

注意事项

 

• 本产品为5次操作
• 操作时，须戴手套
• 反应液（Reagent A），严禁反复冻融
• DNA样品须双链结构
• DNA样品须纯化良好，不宜超过4微克
• 本公司提供系列甲基化分析实际产品

 

质量标准

 

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定反应完全

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