血管紧张素原试剂盒ELISA法

简介
血管紧张素是血管紧张素的前体，在肾素-血管紧张素系统内分解为血管紧张素I和II，它在控制血压方面起着重要的作用。近几年，将众多组织中与肾素-血管紧张素系统相关的动脉血压控制和高血压生理学都归类于血管紧张素领域。在研究患有AII依赖型高血压的大鼠时，尿液中的血管紧张素原作为肾内肾素-AII活性领域的一个标记物，肾内AII依赖型高血压中肾内血管紧张素增加的范围不能用血浆中AII的平衡来解释，因为这是两种不同的机制，细胞摄取AII越多，血管紧张素原在肾内表达越多。

血管紧张素原试剂盒可用于血清，EDTA-血浆，尿液或细胞培养基中人血管紧张素原的定量检测

原理
血管紧张素原试剂盒根据的是Elisa的夹心原理，包被了两种高特异性的抗体，还有作为发色体的TMB显色液，颜色的强弱与人血管紧张素原的含量成正比关系。

预期用途
1 血管紧张素原试剂盒可用于检测血清，EDTA—血浆，尿液或者是细胞培养基中的人血管紧张素原。还可以用缓冲液稀释试验样品
2 尿液样品的需稀释4到8倍
3 血清或EDTA—血浆需稀释至10000倍
4 细胞培养基则用的细胞不同，应依据各试验室来确定稀释比例

检测范围
0.31~~20ng/mL(6.0~384.6Pmol/L相当于分子量为52kDa的人血管紧张素原)

试剂盒的组成
1 包被板：抗人血管紧张素原（72）的兔子IgG抗体              1x96孔
2 标记抗体的酶联物：（30 x）的辣根过氧化物酶与抗人血管紧张素原（601）小鼠IgG抗体的Fab                                           0.4mL x1
3 标准品 人血浆中提取的血管紧张素原                          0.5mL x2
4 缓冲液                                                     30 mL x1
5 稀释液（用于标抗） 1%BSA，0.05%PBS，吐温20              12mL x1
6 显色液 TMB                                                15 mL x1
7 终止液 1N H₂SO₄                                                                  12mL x1
8 洗涤液缓冲液（用于酶联物） (40X) 0.05% 磷酸缓冲液，吐温20                       
50mL x1

准备工作
1 实验材料（但试剂盒未提供）
酶标仪（450nm）                        移液枪和枪头
量筒和烧杯                              双蒸水
孵箱（37℃±1℃）                       坐标纸
吸水纸                                  稀释标准品的稀释管
洗涤瓶
一次性试管

2 试剂准备
1）洗涤缓冲液
   试剂盒中所提供的洗涤液是40X的，需稀释，先将其放置至室温，轻轻摇晃混匀，然后吸取50mL与1950mL的蒸馏水混合，即得，此试剂可在冰箱中存储2周。
2）标记抗体
   30X的标抗酶联物与稀释液按比例要求混合30分钟，即得
（例：如果使用的是一条板（8孔），那需要800μL标抗酶联物，吸取30μL的酶联物与870μL的稀释液混合。每孔加100μL）
此试剂随配随用
试剂盒中的标抗酶联物应装在密闭瓶内放置在4℃下保存
3）标准品
   将0.5mL的蒸馏水加入到标准品的瓶内，摇晃混匀。得到的是40ng/mL的人血管紧张素原标准品
4）稀释标准品
   准备8个试管来稀释标准品，每管加入230μL缓冲液

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