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非洲猪瘟病毒荧光 PCR 检测试剂盒

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【兽药名称】

通用名称：非洲猪瘟病毒荧光 PCR 检测试剂盒

商品名称：无

英文名称：Africa swine fever virus nucleic acid Real–time PCR rapid test kit

汉语拼音：Feizhouzhuwen Bingduhesuan PCR Yingguang Kuaisu Jiance Shijihe

【主要成分和含量】

【作用与用途】用于全血、血清、脾脏、淋巴结等样品中非洲猪瘟病毒核酸的检测。

【用法与判定】

1 用法

1.1 待检样品采集、保存及运输

1.1.1 样品采集可根据现场实际情况采集全血、血清、脾脏、淋巴结等样品。

1.1.2 样品保存所有待检样品常温保存应不超过 24 小时；2～8℃保存应不超过 1 周；在-20℃冰箱冷冻保存应不超过 6 个月；长期保存时，以-70℃以下冰柜为宜。

1.1.3 样品运输样品放置在有干冰或冰块的冷藏包中，保持全程冷链运输。

1.1.4 样品的采集、保存、运输等处理应按照国家相关法律法规进行。

1.2 样品处理

1.2.1全血、血清、血浆样品使用商品化试剂盒提取核酸进行检测。也可用免提法进行快速检测：取 10μl 样品加入到 100μl 缓冲液 A 中，震荡混匀，煮沸 5 分钟或金属浴 99℃孵育 5分钟，加入 100μl 缓冲液 B，涡旋混匀，12000r/min 离心 1 分钟，取上清液进行核酸检测。

1.2.2 淋巴结、脾脏等组织样品取 0.1～0.2g（黄豆粒大小）加入 10 倍体积的生理盐水，采用研磨法制成组织匀浆液，8 000 r/min 离心 2 分钟，取上清液使用商品化试剂盒提取核酸进行检测。

1.3 扩增试剂准备根据待检样品数量准备相应的反应管，每管中加入 20μl 荧光 PCR Cat.#SD-D-3811版号/次：A/1应液，然后取 5μl 待检样品加入到反应管中，盖紧管盖，混匀后短暂离心。按照阴性对照、待检样品、阳性对照的顺序加入。

1.4 荧光 PCR 反应将反应管放入到荧光 PCR 仪中，按照如下程序进行检测：1）变性，95℃ 2 分钟；2）扩增，95℃ 5 秒，60℃ 30 秒，45 个循环，在 60℃采集 FAM 荧光信号。

2 结果判定

2.1 有效性判定阳性对照应出现特异性扩增曲线，且 Ct 值＜32，阴性对照应无 Ct 值；否则试验结果无效。

2.2结果判定

当检测样品有典型的扩增曲线且 Ct 值＜40 时，判定为阳性；当待检样品的扩增结果无 Ct 值或背景信号之下时，判为阴性。

【注意事项】

（1）使用本试剂盒的实验室应严格保证生物安全，并按照国家有关规定进行管理。

（2）分子检测实验室建议分区使用：配液区、模板提取区、扩增区，物品流通顺序为配液区→模板提取区→扩增区。严禁器材和试剂倒流。

（3）缓冲液 A、B 使用前恢复至室温并充分摇匀，恢复至室温的缓冲液 A、B 液可室温保存。

（4）荧光 PCR 反应液、阴性对照、阳性对照应该在规定温度存储。使用前应完全融化，瞬时离心，使液体汇于管底，并放于冰上，使用后应立即冻存。

（5）提取的病毒核酸长期保存时，应该存储于-20℃以下。

（6）吸取荧光 PCR 反应液时，应尽量避免产生气泡；扩增试剂准备时应按阴性对照、待检样品、阳性对照的顺序加入 PCR 反应管中。加样结束应盖紧反应管，瞬离至管底。

（7）处理样品用器械及废弃物品应高压灭菌。检测过程中使用过的吸头，应直接打到盛有10% 次氯酸的带盖废物缸内。检测结束的 PCR 反应管，严禁打开管盖。所有废弃物高压处理。

（8）工作台及各种实验用品应定期清洁并用 10% 次氯酸或紫外灯进行防污染处理。

（9）严禁使用超过有效期限的试剂；不同批号的试剂请勿混用。

（10）若试剂不慎溅入眼睛或沾到皮肤，请及时用大量清水冲洗。

【贮藏与有效期】 -20℃以下保存，有效期为 12 个月。

【规格】（1）50 份/盒；（2）100 份/盒。

售后服务