western blot显色液（DAB)

DAB显色试剂盒（20×）说明书

货号：DA1010

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规格：        

保存：   -20℃避光密闭保存，一年有效，避免反复冻融；短期可2-8℃保存。产品简介：   二氨基联苯胺（Diaminobenzidine,DAB）是过氧化物酶（POD）的显色底物，DAB显色液主要用于免疫过氧化物酶法，适用于辣根过氧化物酶HRP标记的免疫印记或免疫组化反应。过氧化物酶催化底物发生反应，于反应部位产生棕色沉淀物，免疫印记可直接在膜上显示条带；免疫组化标本显色时间一般为室温5-20分钟，随后在显微镜下观察显色情况，显色充分后应将标本及时脱水封固，其终产物可直接在光镜下观察，也可经OsO4处理后，增加反应产物的电子密度，用于电镜观察。操作说明：

• 对于组织切片或蛋白质印记膜，在与辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟。
• 取900μl PBS（或双蒸水），加入50μl 溶液A，50μl 溶液B混合均匀，即配成DAB工作液。

如需要更大体积工作液，可按比例放大。此溶液必须现用现配，配好后避光保存，1小时内使用，过期后请将剩余的液体废弃。

• 向组织切片或印记膜上加入适量DAB工作液，确保能充分覆盖样品。 
• 室温避光孵育3-10 分钟或更长时间，避免光照，直至显色至预期深浅。 
• 去除DAB染色工作液，用蒸馏水洗涤2-3次即可终止显色反应。 
• 对于组织切片或细胞样品，显色反应终止后，可对其进行其他染料复染。对于膜，显色反应终止后，可以室温晾干避光保存。

注意事项：

• DAB溶液应低温密封保存。如有结晶析出，应确保结晶完全溶解再行使用。
• 显色工作液应现用现配，新鲜配制的工作液应为无色或浅棕色，如颜色过深，请勿使用。
• 显色时间严格控制，根据情况调整，以免显色过度。固相膜显色数小时后即会褪色，不能永久存在。
• DAB为可疑致癌物，请采取必要的防范措施。操作时应戴手套，尽量避免与皮肤接触，用后及时彻底冲洗，接触DAB的实验用品最好经洗液浸泡24h后使用。

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