【膜蛋白提取】Rho1D4 琼脂糖

产品名称：PureCube Rho1D4 Agarose

产品简介：Rho1D4纯化体系是基于Rho1D4抗体与融合蛋白表面Rho1D4表位的高特异性结合而研发的，适用于膜蛋白的纯化。具有Rho1D4表位序列标签的膜蛋白可以通过PureCube Rho1D4 Agarose，利用Rho-tag高特异性来纯化。德国Cube Biotech技术团队依托在蛋白和膜蛋白生物化学和有机化学等技术的实力，将专用于膜蛋白纯化的Rho1D4系列蛋白纯化体系的免疫亲和产品产业化。

德国生产商介绍: 德国Cube Biotech是一家专注于蛋白纯化产品的生产商和服务商，尤其擅长于蛋白纯化及膜蛋白纯化。Cube Biotech研发团队拥有逾40年经验致力于膜蛋白的表达、纯化和结晶等研究。在医学研究相关的人体膜蛋白等方面，如:转运蛋白或G蛋白偶联受体(GPCRs)等有效的药物设计取决于膜蛋白结构信息的表达，依托在蛋白和膜蛋白生物化学和有机化学等技术的实力，Cube Biotech将专用于膜蛋白纯化的Rho1D4系列产品产业化，现已与全球多家高校实验室、科研机构、制药企业成为紧密的长期合作伙伴，推进了欧美膜蛋白研究以及生物制药的进展。德国Cube Biotech系列产品应用已刊登在《美国化学会-应用材料与界面》（ACS Applied Materials & Interfaces）等期刊，并且PureCube Rho1D4琼脂糖产品应用已被Springer旗下Human Press出版社出版的Methods in Molecular Biology Series（分子生物学方法系列实验指南丛书）所采用。

产品优势：

1）PureCube Rho1D4 Agarose被证实特别适用于膜蛋白的分离纯化研究，结合效率可高达3-4mg/mL；

2）对膜蛋白提取具有高度特异性；

3）可重复再生使用；

4）德国制造；

5）配合Nanodisc使用，是有效的膜蛋白提取解决方案；

6）PureCube Rho1D4琼脂糖产品应用已被Springer旗下Human Press出版社出版的Methods in Molecular Biology Series（分子生物学方法系列实验指南丛书）所采用。

产品详解：

对膜蛋白提取有高特异性和高产量

每个批次的PureCube凝胶均是按照严格的质量标准体系生产并严格检验，以确保每一批分装的产品都有高的蛋白结合能力。通过与特异性抗原表位相互作用，辅以优化过的纯化操作步骤，能使目标蛋白在洗脱组分中有高产出量。图1是对CXC趋化因子受体4(CXCR4)的纯化。溶于Fos-Choline®-14的带标签蛋白通过大肠杆菌表达，再经由含PureCube Rho1D4琼脂糖的层析柱纯化。用Rho1D4多肽作为洗脱液，4次洗脱组分每毫升共收集到0.8mg、1.0mg、0.85mg和0.6mg目标蛋白。蛋白印迹结果说明CXCR4大约是65 kDa和35 kDa。这些条带是39.7 kDa膜蛋白的二聚体和单体。单体、二聚体的分离以及去除洗脱肽段，可以通过排阻层析的方法实现。

什么是Rho1D4?

Rho1D4是细胞内牛视紫红质C末端的最后九位氨基酸。Rho1D4得名于与该序列特异性结合的单克隆抗体。该表位通过与Rho1D4抗体结合可作为针对膜蛋白的高特异性纯化标签。

表1是有文献报道的使用Rho1D4系统纯化膜蛋白的纯度和产率。尽管很多用Rho1D4系统纯化的膜蛋白均为G蛋白偶联受体家族，该系统也可以有助于辨别其他如转运体之类的膜蛋白。 IAC：免疫亲和层析；SEC：排阻层析。

在20世纪80年代发现Rho1D4表位和配对抗体，当时通过将抗体偶联到Sepharose®上来纯化在猴肾细胞中表达的牛视紫红质。自此，Rho1D4系统（标签，偶联抗体的亲和基质，洗脱肽）开始用于少量膜蛋白的纯化，包括G蛋白偶联受体（GPCR），ATP结合转运体，溶质反向转运体和一个四次跨膜蛋白。

图2：假设有3个跨膜域的膜蛋白。Rho1D4标签加到膜蛋白C端，它的序列是T-E-T-S-Q-V-A-P-A

通过转基因修饰在目标膜蛋白的C端（或N端）加上Rho1D4标签（如图1）。一旦配有该序列，即可用装载有Rho1D4抗体的亲和基质捕获目标蛋白，并随后通过添加过量Rho1D4多肽，产生竞争性结合基质表面抗体来洗脱目标蛋白，用此方法洗脱比改变pH值等方式更加温和。

Rho1D4系统的一大优势是抗体与表位相互作用特异性非常高。而其另一大优势是洗脱目的蛋白收率相当高。利用Rho1D4纯化的目标蛋白可用于功能性研究，如配体结合的特性，蛋白与蛋白间的相互作用。

*纯度是从低浓度经一步Rho1D4 IAC在反应溶液中得出的；产率是在洗脱成分浓缩并过SEC柱后计算。

技术参数：

相关产品:

1、所有PureCube系列琼脂糖产品均提供用于自动液相色谱系统（如：FPLC）的预装柱（提供1mL）

2、用于稀释样品或用于pull-down实验，我们推荐使用PureCube Rho1D4 Magbeads磁珠

3、Rho1D4抗体：这种抗体作为分离物质来生产PureCube的Rho1D4琼脂糖。也可以在Western Blot实验或者ELISA实验中检测rho-tagged蛋白。

4、Rho1D4多肽：在洗脱缓冲液中，Rho1D4多肽竞争结合到亲和层析凝胶上然后释放标签蛋白,相对于改变洗脱液的pH值来说提供了更温和的洗脱环境。Cube Biotech 提供了一系列的Rho1D4肽段，这些肽段已经被PureCube Rho1D4琼脂糖验证。

Rho1D4多肽可以单独购买，也可以购买PureCube Rho1D4套装。详情请参见订货信息以及公司官网。