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西美杰代理KPL荧光标记二抗选择指南
英文名称:总访问:558
国产/进口:进口半年访问:69
产地/品牌:KPL产品类别:抗体
规       格: 最后更新:2024-12-6
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  • 公司简介
一般来讲,偶联到二抗上的探针主要有酶(辣根过氧化酶HRP和碱性磷酸酶AP或其衍生物APAAP,PAP),荧光基团(FITC, RRX, TR, PE, Rhodamine)和生物素。选用哪种探针的二抗主要取决于具体的实验,对于Western Blot和ELISA,最常用的二抗是酶标二抗;而细胞或组织标记实验(细胞免疫化学,组织免疫化学,流式细胞术)中通常使用荧光标记的二抗。如果想要更大程度的放大检测信号,可以使Biotin/Avidin检测系统。其中荧光素是具有光致荧光特性的染料,荧光染料种类很多,目前常用于荧光标记二抗的主要有以下几种:
  • 异硫氰酸荧光素-Fluorescein Isothiocyanate (FITC)
FITC纯品为黄色或橙黄色结晶粉末,易溶于水和酒精溶剂。FITC分子量为389.4,最大吸收光波长为490~495nm,最大发射光波长为520~530nm,呈现明亮的黄绿色荧光。FITC在冷暗干燥处可保存多年,是目前应用最广泛的荧光素。由于FITC是小分子化合物,每一个抗体可标记几个FITC分子,IgM通常用小分子的荧光素标记,如FITC、Cy3/5、Texas Red等。FITC荧光二抗主要优点是人眼对黄绿色较为敏感,通常切片标本中的绿色荧光少于红色。然而FITC的缺点是淬灭快,因此要和抗淬灭剂一起使用。
  • 四甲基异硫氰酸罗丹明-Tetramethyl Rhodamin Isothiocyanate(TRITC),Rhodamine Red-X(RRX), Texas Red(TR)
这些罗丹明的衍生物耦联基团具有不同的吸收波长 (550, 570, 596nm)和最大发射波长(570, 590, 620nm)。在使用装有氪氩灯的激光共聚焦扫描显微镜作三标记的实验时,RRX尤其有用,可以和Cy2(或者FITC)和Cy5一起使用,因为RRX的发射波长在Cy2和Cy5中间,而且和这两者覆盖都很少,氪氩灯激发光为488nm,598nm和647nm,分别是Cy2(FITC), RRX和Cy5的理想激发波长。因为FITC和PE可以被氩灯的488nm波长激发, 在流式细胞仪中用FITC作双标,另一种用藻红蛋白(PE)耦联基团要比罗丹明好。TRITC为罗丹明的衍生物,呈紫红色粉末,较稳定,最大吸收光波长为 550nm,最大发射光波长为620nm,呈现橙红色荧光,与FITC的绿色荧光对比鲜明,可配合用于双重标记或对比染色。因TRITC荧光淬灭慢,也可用于单独标记染色。
  • 菁类染料-Cyanine dyes(Cy2, Cy3, Cy5)
Cy2耦联基团激发波长为492nm,发光波长为510nm的绿色可见光。Cy2和FITC使用相同的滤波片。由于Cy2比FITC在光下更稳定,要避免使用含有磷酸化的苯二胺的封片剂,因为这种抗淬灭剂和Cy2反应,在染色片储存后会导致荧光微弱和扩散。Cy3和Cy5比其他的荧光团探针要更亮,更稳定,背景更弱。Cy3耦联基团激发光的最大波长为550nm,最强发射光为570nm。因为激发光和发射光波长很接近TRITC, 在荧光显微镜中,可使用和TRITC一样的滤波片。Cy3在氩光灯(514nm或528nm)下可以被激发出50%的光强,在氦氖灯(543nm)或者汞灯(546nm)下则约75%。Cy3可以和荧光素一起作双标。Cy3还可以和Cy5一起在共聚焦显微镜实验中作多标记。Cy5耦联基团的激发波长最大650nm,发光波长最大670nm。在氪氩灯(647nm)下它们可被激发出98%的荧光,在氦氖灯下(633nm)为63%。Cy5可以和很多其他的荧光基团一起用在多标记的实验中。由于它的最大发射波长在670nm,Cy5很难用裸眼观察,而且不能用汞灯作理想的激发。通常观察Cy5时采用具有合适激发光和远红外检测器的共聚焦显微镜,在水相封片剂中应当加入抗淬灭剂。使用传统的表面荧光显微镜时,不推荐使用Cy5。
注:由于观察荧光需要一定波长的激发光,必须根据实验室已有的仪器可发光的波段进行选择。另外注意多标记中对探针色彩区分程度的要求,例如,若丹明红-X (RRX)和德克萨斯红(TR)荧光素的区别就比四甲基若丹明(TRITC)或者Cy3的区别明显。如果对灵敏度有更高的要求,则Cy3和Cy5就比其他的荧光团探针要亮。

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西美杰代理的全球知名二抗和底物生产厂商LGC·Seracare·KPL提供丰富的荧光标记二抗,可检测抗人、大鼠、小鼠、猪、驴、绵羊、山羊、小鸡、马、兔、仓鼠、狗、牛,以及多种细菌类等物种;另外,还有IgG、IgA、IgM以及IgG(Fc)、IgG(ab’)2等不同类型抗体。小编下面汇总了部分常用荧光二抗:
 
  FITC TRITC Cy3 Cy5
抗人 5230-0288 5230-0288 - 5230-0370
抗小鼠 5230-0427 5230-0336 5230-0364 5230-0376
抗兔 5230-0298 5230-0332 5230-0359 5230-0372
抗山羊 5230-0294 - 5230-0358 5230-0371
抗绵羊 5230-0324 - - -
抗鸡 5230-0325 - - 5230-0379
抗鸭 5230-0326 - - -
抗狗 5230-0314 - - -
抗猫 5230-0317 - - -
链霉亲和素 5270-0028 - 5270-0022 -
注:表格数字部分为产品货号


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