讲座回顾:RePlex技术简化您的Western Blot流程

讲座背景
 

      为了从一个印迹中获得更多的信息，或者遇到珍贵样本，人们通常在传统Western Blot中利用洗脱和重杂交（Stripe & Reprobe）的方式进行蛋白多靶点分析。

      然而，会面临如下令人头疼的问题：

• 洗脱次数不够，无法充分解离靶点和抗体，影响二次杂交

• 洗脱次数太多，导致膜上蛋白丢失

• 由于每个靶点和抗体亲和力不同，需要不停摸索洗脱条件

   

      进而，导致不可避免的蛋白和信号损失。因此，不能获得准确的定量数据。

      Digital Western Blot （ 即Simple Western ）中的RePlex技术，是一种优化且自动化的两步免疫测定，能够在不损失信号强度和不影响表位结合的情况下，获得精确定量、多重蛋白表达的数据。

      本次网络研讨会中，来自洛桑大学蛋白质分析部门（PAF）的Lorrain博士，介绍了如何利用RePlex技术，来推进三种特定的、多重的生物检测项目。她同时也分享了检测的设计和优化，其中一个案例，利用了来自同一物种的两种抗体，但使用不同检测通道。以及，比较了几种常见的管家蛋白与总蛋白归一化的研究。

      这些研究结果，为如何设计RePlex实验提供了指导，并体现了RePlex技术在免疫测定时的灵活性、可重复性和精确定量。

• Digital Western Blot工作原理 & 优势

• RePlex技术解析

• RePlex技术应用案例分享，来自洛桑大学：HA-HSP90转染 （野生型或磷酸化位点突变型）、管家蛋白 VS 总蛋白定量

• RePlex技术总结：

  可量化表达磷酸化靶标和总蛋白水平

  可在同一毛细管中进行总蛋白归一化检测

  免疫探针的选择上有更大的灵活性

  每个样品可得出更多的数据信息

  节省耗材、珍贵样品和宝贵时间