天信和人二倍体细胞低血清培养技术平台助力疫苗研发

人二倍体细胞来源于正常人胚胎，为人源有限传代系，在传代过程中保持二倍体核型，避免了传代细胞生产所带来的致癌性风险，具有较高安全性，也较原代动物细胞外源因子传播风险更低，因此被广泛应用于疫苗生产。人二倍体细胞狂犬病疫苗更是被WHO誉为狂犬病疫苗金标准，具有免疫原性好、起效速率快、安全性好、免疫持续时间长等优点。
 
中生天信和针对人二倍体细胞开发了 ToCell® HDC SLM-A低血清细胞培养基，无动物源成分，可适用于MRC5细胞和2BS细胞的低血清高密度贴壁培养。
 
HDC SLM-A细胞培养基
 
HDC SLM-A细胞培养基的特点
◆ 更低的血清添加量    
◆ 无动物源成分   
◆ 更快的生长速度    
◆ 提高生产效率 HDC SLM-A细胞培养基的应用
适用于人二倍体细胞低血清高密度贴壁培养环境，并满足水痘、狂犬、乙脑、甲肝等疫苗工艺生产需求。
 
人二倍体细胞低血清培养工艺
 
方瓶培养
以2BS细胞为例：
（1）接种密度：4.5×10⁶cells/T75。
（2）培养液：30ml。
（3）传代时间：72-96h。
（4）传代依据：细胞在方瓶中长成致密单层后进行传代。
（5）培养液pH：不得低于7.0。
细胞工厂培养
   细胞复苏后从方瓶扩增至细胞工厂，一个5层细胞工厂接种100×10⁶cells（按3×10⁴cells/cm²），加培养液150-200ml/层，培养3-4天，待细胞长成致密单层后进行传代。
细胞工厂传代：
（1）缓慢弃去细胞工厂中的培养液，加入PBS润洗1-2遍。
（2）弃去PBS后加入约25ml/层0.25%胰酶溶液（若使用无EDTA的胰酶，可适当延长消化时间）。
（3）充分浸润细胞1-2min后，弃去胰酶，将细胞工厂置于37℃温箱5-6min。
（4）镜检90%以上细胞均变圆变亮后拍打细胞工厂，使细胞分散。
（5）再加入新鲜培养液重悬细胞，并晃动细胞工厂，使细胞从细胞工厂完全脱落。
（6）将重悬好的细胞倒入无菌容器混匀后取样计数，进行下一步扩增、培养。
 
注意事项
（1）保证细胞来源可靠，并检测无支原体及外源病毒污染。
（2）人二倍体细胞连续传代次数有限，需采用低代次细胞用于实验。
（3）每次传代使用新的方瓶、细胞工厂。
（4）弃液时，尽量弃于灭菌容器中，减小污染风险。
（5）细胞工厂接种需加入培养基充分混匀细胞，保证每层细胞数相对均匀。
（6）培养过程中观察细胞时尽可能不要过度晃动细胞工厂，防止已贴壁的细胞有局部脱落可能。
 
异常处理
（1）培养过程中尽可能分开进行种细胞传代。
（2）如遇细胞培养中培养液浑浊，请选择当天不进行细胞实验的房间进行取样镜检，镜检下有明显游动的微生物则很可能是细菌污染，若不是特别明显可取一些培养液在TSA平板中培养24-72h观察。
（3）如遇培养液清澈，但细胞生长明显受限或死亡，请选择当天不进行细胞实验的房间进行取样，进行支原体或外源病毒检测。
（4）确定污染后务必弃去所有污染细胞、停用使用中的培养基，对实验环境进行彻底消毒灭菌后再进行下批实验。
 
 
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