同立海源回放:小核酸药物体外转染到体内递送全解析

A:从基因沉默的角度看，siRNA似乎可以取代反义核酸，因为siRNA的效率更高。不过还不能说完全取代，首先siRNA是双链的，成本也相应高一些，需要给药系统，对于肝脏可能问题不大，对肝外还是会有一些问题存在。就这个角度，反义核酸给药系统要求没有那么高，相对比较稳定，对于腔内注射反义核酸的效果是比较好的。从剪切和调控机制siRNA明显是可以取代反应核酸的，另外基因沉默靶点这块可以考虑用siRNA取代反义核酸可以达到更好的效果。

A:mRNA的特点是表达后的蛋白可以用于基因编辑、CAR-T或者疫苗。siRNA主要用来封闭基因，它们都有不同的重点用途。不过mRNA需要纳米递导，不包封没有足够的稳定性，并且有复杂的专利覆盖和成本及技术上的挑战。siRNA因为是全合成，很容易生产，操作性更强，也没有专利覆盖，所以两者发展前景目前很难说。

A:产品优势主要在于通过提升内含体的逃逸水平。传统转染试剂可通过表面正电荷帮助siRNA大量摄取入胞，但入胞后siRNA内含体逃逸水平低，造成摄取的siRNA无法发挥作用，同时造成细胞毒性。本品为非强正电型脂质转染试剂，避免细胞大量摄取造成的毒性，但本品可提升细胞内吞后的siRNA内含体逃逸效率，通过促进内含体逃逸使更多siRNA释放入细胞质中实现高效基因沉默作用。故在细胞水平上通过荧光标记siRNA进行条件优化的方法不适用于本转染试剂。推荐使用Western Blot或QPCR方式对最佳转染浓度进行优化。

A:产品组分有A液和B液，将siRNA配液放入EP管，加入A液混合均匀，再加入B液混合均匀，室温下放置5分钟，再加入相应的培养基到孔板即可。详见产品说明书。

A: 建议用量

注：使用本转染试剂对细胞进行siRNA转染时，为了获得最佳基因沉默效果，每一种细胞系转染siRNA的剂量都需要经过实验确定最佳范围。