海狸磁珠-mRNA疫苗质量控制关键原料限量试用20份！
浏览次数：5462 发布日期：2022-5-9
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2021年2月24日，《MIT Technology Review》发布了“全球十大突破性技术”名单，其中榜首即是mRNA疫苗。从2019年12月新冠爆发到2022年4月1号，全球新冠确诊已超4.8亿。新冠病毒的蔓延促进了mRNA疫苗的发展。mRNA疫苗在新冠疫苗开发方面的成功，也促进了其在各种传染病与肿瘤等治疗方面广阔的应用前景。
mRNA疫苗的生产流程包括序列设计、mRNA体外转录、体外修饰（加帽、加尾）、脂质体包被等过程。2020年发布的《预防用新型冠状病毒mRNA疫苗药学研究技术指导原则》中对mRNA的质量提出了一系列的要求，加帽率和加尾长度是其中最关键的2个指标。5’cap (5’帽)结构是翻译起始所必须的结构，为核糖体识别mRNA提供信号，并协助核糖体与mRNA结合使翻译从起始密码子开始。3’poly(A)（3’尾）可以控制mRNA的稳定性，以防降解，所以在mRNA合成修饰过程中，需要对5’加帽效率和3’poly(A)尾的分布进行监控。 |
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图.1 mRNA的结构可以分为5个部分，
包含5’cap，5’UTR，ORF，3’UTR和3’polyA。 |
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| 疫苗mRNA因为长度较大，为几千个核苷酸，而无法直接进行检测，因此需要将5’ cap和3’ poly(A)端酶切成短片段，酶切之后5’ cap和3’ poly(A)均可以通过纳米磁珠进行高通量、快速分离，这种纳米磁珠通常粒径在1-3μm之间。 |
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| 测定加帽效率主要是通过将5’cap端与生物素标记的引物退火，然后将5’cap端酶切成小片段，通过SA磁珠捕获出biotin标记部分，然后将5’cap从磁珠表面洗脱，通过毛细管凝胶电泳或质谱法进行检测（图2）。 |
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| 图2. mRNA 5’帽子序列酶切，磁珠分离纯化流程 |
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| 3’PolyA尾的检测方法与5’加帽效率的检测方法类似，需要通过酶切的方式获得3’端的Poly A尾短链，然后利用Oligo dT磁珠分离纯化，再分别进行毛细管电泳或质谱准确分析其长度分布（图3）。 |
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在mRNA的5’端加帽效率和3’加尾分布的检测过程中，都需要磁珠进行mRNA片段的富集。磁珠的性能影响到整个检测数据的准确性和可靠性，该过程中的磁珠一般需要如下的特征：
a) 非特异性吸附低；
b) 灵敏度高，磁珠表面具有丰富的结合位点；
c) RNA易洗脱，磁珠表面需要特殊的封闭；
d) 耐受有机溶剂，部分操作会使用95%乙醇，对磁珠的溶剂耐受性有很大的要求。 |
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BeaverBeads® Streptavidin磁珠，表面共价修饰有大量的链霉亲和素蛋白，可高效快速地结合生物素化抗 体、核酸、蛋白等生物配体。
BeaverBeads® Oligo (dT) 磁珠，表面共价偶联 Oligo (dT)，可与真核生物 mRNA 尾部的 Poly A 互补配对，可高效地从真核生物总 RNA 或直接从动植物组织或细胞裂解物中快速分离出完整、高纯度的 mRNA。
分离得到的 mRNA 可用于多种分子生物学实验：RT-PCR、 固相 cDNA 文库构建、RACE、Northern 等。该类产品为超顺磁性微球，可配套自动化设备进行高通量操作。 |
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| 表1. BeaverBeads® Streptavidin / Oligo (dT)产品性能 |
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| 海狸生物创立于2011年，位于苏州工业园区，场地超过12000㎡。企业专注于纳米磁珠技术的研发和产业化，服务于体外诊断、生物制药、动物疫病检测、环境检测、食品药品安全检测、生物科研等领域；提供纳米磁珠原料、蛋白偶联中间体、免疫标记与捕获磁珠、核酸提取磁珠及试剂盒、真菌毒素净化试剂盒等产品并辅助自动化设备及配套的生物耗材；拥有ISO9001和ISO13485国际质量管理体系认证，部分产品获得I类医疗器械备案和生产许可。 |
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