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稳定同位素标记 SILAC 技术实验流程简介
点击次数:406 发布日期:2019-1-10  来源:辉骏生物
一、SILAC概述
         SILAC即细胞培养条件下稳定同位素标记技术(Stable isotope labeling with amino acids in cell culture,SILAC),其基本原理是在细胞培养时,采用含有轻、中、重同位素型必需氨基酸的培养基进行细胞培养,用于SILAC主要的稳定同位素氨基酸是Lys和Arg, 细胞在传代培养过程中同位素氨基酸将被细胞用于合成蛋白质,细胞经传代培养5-6代后,细胞的所有蛋白质将被同位素标记,等量混合标记的蛋白质后经过SDS-PAGE分离和质谱分析,通过比较一级质谱图中三个同位素型肽段的面积大小进行相对定量,同时二级谱图对肽段进行序列测定从而鉴定蛋白质。

         由于SILAC标记技术是体内标记技术,几乎不影响细胞的功能,同时灵敏度高,因此其在蛋白质组学相关领域中得到了广泛的应用,如比较蛋白质组学,蛋白质与蛋白质相互作用,蛋白质与DNA相互作用,蛋白质与RNA相互作用等领域。
 
二、与体外标记技术相比,SILAC属于体内标记,具有以下技术优势
     1、高通量,可同时鉴定并定量数百至数千种蛋白质;
     2、定量精确,降低由于样品制备不同而造成的实验差异;
     3、线性定量范围广;
     4、灵敏度更高,蛋白质需要量明显减少;
     5、标记采用的是体内标记技术,更接近样品真实状态。
 
三、SIALC技术服务流程
 
 
四、SILAC技术服务内容
    1、细胞同位素标记;
    2、样本制备与定量;
    3、SDS-PAGE分离;
    4、胰酶酶切后液相分离和质谱分析;
    5、数据库检索;蛋白质定量分析;
    6、相关生物信息学分析;
    7、实验报告提交。
 
五、送样须知
    1、技术咨询:在您开始实验之前,本公司将为您竭诚提供最有效的SILAC实验设计方案,本公司提供Lys和Arg均为L、M 、H标记的氨基酸。
    2、为了保证SILAC实验能顺利进行,样品寄送需满足以下要求:
   基本要求:SILAC实验仅适用于能在SILAC培养基中培养的材料,具体情形请咨询本公司。
   运输要求:液氮或干冰保存寄送,广州本地客户可上门收样。
   注:样本应避免各类污染和反复冻融。
 
六、实验报告内容
    1、蛋白质鉴定和SILAC定量分析结果;
    2、顾客指定蛋白质对应的质谱峰图;
    3、SILAC实验完整的实验步骤、使用仪器、软件检索参数等。
 
七、SIALC技术服务案例

 

 
八、质量承诺
    1、严谨的SILAC实验设计方案确保定量分析结果可靠;
    2、提供客观的SILAC实验分析结果。
来源:广州辉骏生物科技有限公司
联系电话:020-32053431
E-mail:Internet@fitgene.com

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