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远离噪音点:western blot封闭那些事
点击次数:495 发布日期:2018-11-6  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负
Western blot封闭步骤为什么重要?
 
样品从凝胶转印到膜上后,在抗体孵育之前都要进行封闭的步骤。 了解封闭的工作原理可提高western blot的质量,提高数据的特异性,灵敏度和信噪比。
 
蛋白封闭液是如何工作的?
通用的PVDF膜和NC膜具有很强的蛋白结合能力,如果跳过封闭步骤,一抗或二抗可能非特异性地与膜结合,导致高背景或“噪音点”的印迹( 图1)。 封闭缓冲液覆盖或“封闭”这些非特异性蛋白结合位点,确保大部分一抗仅与靶蛋白结合(图2)

如果选择有效的封闭缓冲液,可以减少非特异性结合而不干扰抗体 - 抗原结合。


如何进行封闭液的选择?
 选择正确的封闭缓冲液取决于几个因素,包括一抗的靶标和正在使用的检测系统。 一些最常用的封闭缓冲液含有蛋白质封闭试剂。 蛋白封闭试剂可以是蛋白质混合物,例如脱脂奶粉或血清,或单一蛋白质,例如BSA。 脱脂奶粉是一种流行的封闭试剂,因为价格低廉且易于找到。 然而,牛奶含有磷蛋白,可能干扰抗磷酸化蛋白抗体western blot检测。 牛奶还可以干扰基于生物素 - 链霉抗生物素蛋白的检测系统。 在这些情况下,含有BSA的封闭缓冲液可能是优选者。 或者,为了避免抗体和蛋白封闭试剂之间潜在的交叉反应,可以使用无蛋白封闭试剂如PVP-40。
Azure Fluorescent Blot Blocking Buffer经过优化,配合Azure多功能成像系统和sapphire双模式多光谱激光成像系统使用,可降低背景噪音和产生稳定荧光信号。
来源:北京深蓝云生物科技有限公司
联系电话:010-57256059
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