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阪崎肠杆菌核酸检测试剂盒(一管式PCR-荧光探针法)使用说明
点击次数:628 发布日期:2018-4-16  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负

阪崎肠杆菌核酸检测试剂盒(一管式PCR-荧光探针法)

产品说明

 阪崎肠杆菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)参照SN/T 1870—2016 进出口食品中食源性致病菌检测方法 实时荧光PCR法进行设计,可针对食品样品中阪崎克罗诺杆菌(阪崎肠杆菌)的特异核酸片段进行扩增,通过实时扩增曲线判定结果。该产品检出限为10^3 cfu/ml(使用071021M细菌基因组DNA提取试剂盒提取1 ml 10^3cfu/ml增菌液的细菌基因组DNA作为模板)。

 

产品组成( 96测试)

 

011122L

试剂

含量

A-ES-P

20μL × 8管×12排

NG-P

100μl×3支

PG-ES-P

100μl×2支

 

适用仪器

   荧光PCR仪(如ABI 7500)等可配套0.1 mlPCR八联管的PCR扩增仪。

自备耗材和仪器

①灭菌1.5mL或2.0mL离心管;③冰盒;④移液器(1-10μL,10-100μL,100-1000μL)及配套灭菌吸头;⑤离心机;⑥涡旋混匀器;⑦金属浴;⑧均质机、搅拌机或研钵等研磨器具;⑨电子天平。

注意事项

1.本试剂检测灵敏度高。为了防止污染,实验要分区操作。

   1)第一区:试剂准备区。

   2)第二区:样本制备区。

   3)第三区:扩增及产物分析区。

   ★ 分区之间最好进行物理性隔离,避免人为因素造成的污染。

2. 实验过程中穿戴工作服和乳胶手套,使用移液器,实验产生的所有废弃物及时处理。

3.严格按照操作步骤操作,试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰上操作。

4.反应液中的成分对光敏感,应避光保存。试剂使用前剪下所需的测试数,解冻后使用前离心30秒。

5.反应结束后,扩增管请置于密封袋内丢弃,当日清理,开盖易造成气溶胶污染,禁止开盖。

6.不同批号试剂请勿混合使用,在有效期内使用。

样品处理

参照《GB 4789.40-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检验》进行阪崎克罗诺杆菌的样品制备、增菌培养和分离。

 

 

 

 

实验操作

1. 模板制备(样本制备区)

建议使用试剂配套细菌组DNA提取系列产品,具体过程详见产品说明书。

2.添加模板(样本制备区,放置于冰盒中进行)

剪下所需测试数的已含有反应液的PCR管,放置在室温待解冻后,离心30秒后揭开封口膜,使用穿刺加样法穿过固封层向每管反应液中分别加入5μL模板,顺序为NG、待测样品模板、PG-ES-P。盖好配套的PCR管盖后,涡旋混匀30s,离心1min,立即进行PCR扩增反应。

3. 扩增反应(扩增及产物分析区)

使用荧光定量PCR仪,荧光基团选择FAM,淬灭基团选择TAMRA。

按下列条件设置扩增反应:

PCR循环

荧光收集位点

95℃

3分钟

1个循环

94℃

5秒

40个循环

60℃

40秒

4.基线和阈值设定

  基线调整取3-15个循环的荧光信号,阈值线应超过阴性对照扩增曲线的最高点。

结果判定

检测样品无Ct≥40,可报告样品阴性,不含有阪崎肠杆菌或含量低于检测限;

检测样品Ct ≤35,曲线呈“S”型扩增曲线,可直接报告样品阳性,含有阪崎肠杆菌。

检测样品35<Ct<40,建议重复实验。重复结果Ct≥40则样品为阴性,否则为阳性。

  • NG反应为平滑直线,PG反应为“S”型扩增曲线且Ct值<30,此次检测结果有效,否则无效。如重复检测结果仍为无效,请与技术支持人员联系。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

企业信息

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电话:021-61119791

 

来源:上海一基实业有限公司
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