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DAPI 简易细胞核形态染色试剂盒产品说明书
点击次数:334 发布日期:2017-11-9  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负

 DAPI 简易细胞核形态染色试剂盒产品说明书

主要用途

 DAPI 简易细胞核形态染色试剂是一种旨在通过使用荧光染料 DAPI 与细胞核 DNA 特异性结合,并发出荧光检测信号,用于分析和观察细胞核形态或 DNA 含量以及双重染色或重叠染色定位的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞核(动物、人体、植物、昆虫等)的观察。产品即到即用,性能稳定,荧光清晰。

技术背景

作为细胞 DNA 染色剂之一的 4,6-二咪基-4-联苯基吲哚(4,6-diamidino-2-phenylindole;DAPI)特异性地与 DNA 双螺旋的凹槽部分发生相互作用,从而与 DNA 的双链紧密结合。结合后产生的荧光基团的吸收峰是 358nm 而散射峰是 461nm,正好是 UV(紫外光)的激发波长 356nm,使得 DAPI 成为一种常用的荧光检测信号,并作为双重染色或重叠染色的主要染色剂之一。

产品内容

染色液(Reagent A)

毫升

产品说明书

1 份

保存方式

 

保存 在-20℃冰箱里,避免光照;有效保证 6 月

 

用户自备

 

磷酸缓冲液(YJ12033.1):用于清洗样品

 

微型台式离心机:用于悬浮细胞的操作

 

盖玻片:用于染色后封片

 

荧光显微镜:用于观察细胞核 DNA 染色

 

实验步骤

 

一、 贴壁细胞染色

1. 准备 1 个细胞培养 48 孔板的待测细胞,每孔铺满率达 70%

(注意:可以使用载玻片,载玻片培养皿,35mm 培养皿,和其它培养孔板,见注意事项 6

2. 进行染色前清理、固着、通透等步骤

3. 小心抽掉预处理液体,空气中晾干

(注意:由此步骤开始,用户可以进行抗体荧光染色或其它荧光染色

4. 小心加入 xx 微升  染色液(Reagent A,覆盖培养孔表面

1

5. 室温下孵育 10 分钟,避免光照

6. 小心抽掉  染色液(Reagent A

7. 小心加入 xx 微升用户自备的磷酸缓冲盐溶液(PBS),覆盖培养孔表面

8. 即刻在倒置荧光显微镜下进行观察:激发波长 350nm,散发波长 460nm(细胞核呈现蓝色)

二、 悬浮细胞染色

1. 将悬浮细胞(1 X 106细胞)移入到 1.5 毫升离心管

2. 放进微型台式离心机离心 10 分钟,速度为 300g(或 2000RPM,例如 eppendorf 5415)

3. 小心抽掉上清液

4. 进行染色前清理、固着、通透等步骤

5. 放进微型台式离心机离心 10 分钟,速度为 300g(或 2000RPM,例如 eppendorf 5415)

6. 小心抽掉预处理液体

(注意:由此步骤开始,用户可以进行抗体荧光染色或其它荧光染色

7. 小心加入 xx 微升  染色液(Reagent A,混匀细胞颗粒群

8. 室温下孵育 10 分钟,避免光照

9. 放进微型台式离心机离心 10 分钟,速度为 300g(或 2000RPM,例如 eppendorf 5415)

10.小心抽掉 xx 微升  染色液(Reagent A

11.小心加入 xx 微升用户自备的磷酸缓冲盐溶液(PBS),混匀细胞颗粒群

12.放进微型台式离心机离心 10 分钟,速度为 300g(或 2000RPM,例如 eppendorf 5415)

13.小心抽掉上清液

14.小心加入 xx 微升用户自备的磷酸缓冲盐溶液(PBS),混匀细胞颗粒群

15.移出 xx 微升到载玻片上,放上盖玻片

16.即刻在荧光显微镜下进行观察:激发波长 350nm,散发波长 460nm(细胞核呈现蓝色)

三、 载玻片染色

1. 准备 1 个细胞载玻片

2. 进行染色前清理、固着、通透等步骤

(注意:由此步骤开始,用户可以进行抗体荧光染色或其它荧光染色

3. 小心加上 xx 微升  染色液(Reagent A,覆盖载玻片表面

4. 室温下孵育 10 分钟,避免光照

5. 小心抽掉 xx 微升  染色液(Reagent A

6. 小心加上 xx 微升用户自备的磷酸缓冲盐溶液(PBS),覆盖载玻片表面

7. 小心抽掉清理液

8. 盖上盖玻片

9. 即刻在荧光显微镜下进行观察:激发波长 350nm,散发波长 460nm(细胞核呈现蓝色)

注意事项

1. 本产品为 100 次操作

2. 本产品友好使用于双重染色或重叠染色

3.  染色液(Reagent A为半通透性染料

4. 操作时须戴手套

2

5. 操作时,避免污染母液

6. 本产品适合各种规格的培养细胞:载玻片,载玻片培养皿,35mm 培养皿,和各种培养孔板,须相应调整试剂溶液:

操作容器

试剂溶液规格

 

 

载玻片

100 微升

 

 

载玻片培养皿

100 微升

 

 

35mm 培养皿

500 微升

 

 

96 孔培养板

50 微升

 

 

48 孔培养板

100 微升

 

 

24 孔培养板

200 微升

 

 

12 孔培养板

400 微升

 

 

6 孔培养板

500 微升

 

 

25cm2细胞培养瓶

1 毫升

 

7. 本产品可用于悬浮细胞或细胞脱离处理后染色

 

8. 本公司提供系列简易细胞核染色分析试剂产品

质量标准

1. 本产品经鉴定性能稳定

2. 本产品经鉴定荧光清晰

来源:上海一基实业有限公司
联系电话:021-61119791
E-mail:2851717098@qq.com

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