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细胞划痕实验介绍
点击次数:3848 发布日期:2014-12-19  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负

细胞划痕实验(Wound Healing)是一种操作简单,经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。这种方法的原理是,当细胞长到融合成单层状态时,在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。

基本的步骤包括“划痕”的制造,细胞迁移期间图像的获得以及后期数据的处理。

特点: 

1,在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程。

2, 非常适合研究细胞与胞外基质(ECM),细胞与细胞之间相互作用引起的细胞 迁移。

3,与包括活细胞成像在内的显微镜系统兼容,可用于分析细胞间的相互作用。

4,研究细胞迁移的体外实验中最简单的方法。

传统实验方法

实验步骤:

1,培养板接种细胞之前先用marker笔在12孔板背面画横线标记(方便拍照时定位同一 个视野)。

2,细胞消化后接入12孔板,数量以贴壁后铺满板底为宜(数量少时可培养一段时间至铺满板底)。

3, 细胞铺满板底后,用1ml枪头垂直于孔板制造细胞划痕,尽量保证各个划痕宽度一致。(人工枪头制造划痕难以保证划痕宽度的一致性,影响实验结果,这也是该方法最大的缺陷。)

4,吸去细胞培养液,用PBS冲洗孔板三次,洗去划痕产生的细胞碎片。

5,加入无血清培养基,拍照记录。

6,将培养板放入培养箱培养,每隔4-6小时取出拍照。

7,根据收集图片数据分析实验结果。

德国IBIDI(易必迪)公司Culture Insert方法

1,准备细胞,培养液,culture Insert。

2,如图,将细胞接种于Dish中间的Insert,细胞长满Insert 区域后用镊子移除Insert即可产生500μm宽度的划痕。

3,每隔4-6小时拍照记录。

4,根据收集图片数据分析实验结果。

实验原理示意图

总结:相比较于传统的划痕实验,Ibidi的设计更科学、重现性更好。

参考文献:
A Novel Sialyltransferase Inhibitor Suppresses FAK/Paxillin Signaling and Cancer Angiogenesis and Metastasis Pathways
J. Y. Chen, Y. A. Tang, S. M. Huang, H. F. Juan, L. W. Wu, Y. C. Sun, S. C. Wang, K. W. Wu, G. Balraj and T. T. Chang
Cancer Research, 2011, 10.1158/0008-5472.CAN-10-1303

来源:上海臻和生物科技有限公司
联系电话:021-61550061
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