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双通道OpenSPR-2加速proteinA与IgG动力学精准检测
点击次数:316 发布日期:2018-10-30  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负

       OpenSPR创新专利LSPR技术即下一代表面等离子体共振(SPR)可用于分析所有类型的相互作用,可实时无标记检测包括蛋白-蛋白,蛋白-小分子,抗体-抗原,蛋白-核酸,蛋白-适体,蛋白-脂质,蛋白-碳水化合物等等。 其中研究的一个主要领域是蛋白-蛋白结合动力学的研究,因为这有助于研究人员了解涉及数百万蛋白的生物过程。 许多科学家也正在应用SPR等技术来确定这些蛋白之间相互作用的动力学常数。
 


 

为什么要研究蛋白-蛋白间的相互作用

      蛋白之间的相互作用对于了解疾病途径,代谢,信号转导,膜转运,毒力和治疗靶点的发现至关重要。 在任何给定时间,任何给定的细胞中,以及在任何维持控制体内平衡的基本过程的生物体内,都发生着数以百万计的蛋白相互作用,因此蛋白间相互作用是解析生命活动的基础,是无论药物研究、疾病机理研究还是基础生物学研究都不可逾越的步骤,是解析生物活动基础的最关键的一步。

 

 

为什么要用SPR研究蛋白-蛋白间的相互作用

      当描述与疾病,信号传导或代谢途径有关的蛋白相互作用时,研究人员通常依赖基于亲和力的定性技术,其仅提供终点数据如Co-IP,ELISA或酵母双杂交。其他技术如BLI,ITC或MST能够提供定量数据,但存在一些缺点,包括低重复性,高样品消耗或需要标记。

相比之下,OpenSPR采用的下一代SPR技术提供了高度可重复,无标记的定量数据,并且样品消耗量极低。 可提供研究人员确定相互作用的kon,koff和KD数值,以便更深入地了解结合的全过程。
 

 

用OpenSPR分析蛋白- 蛋白相互作用的实例

     下面给大家展示的是如何使用OpenSPR双通道仪器来分析protein A与IgG抗体相互作用的结合动力学的实例。 Protein A是由金黄色葡萄球菌产生的一种毒性因子,其通过与IgG抗体的Fc区紧密结合而促进免疫系统逃避。 在OpenSPR配体固定向导软件的逐步引导下,羧基传感器芯片在两个通道上被清洁并激活。 在该实验中,通道1用作参照通道,通道2固定了protein A被用作传感器通道。

       在通道2上固定protein A后,两个通道都被阻断以消除非特异性结合。 制备四种浓度的人IgG并注入两个通道,并使用TraceDrawer分析软件中的1:1结合模型计算结合动力学和亲和力。 下图和表格展示了双通道OpenSPR如何通过参照通道去除任何未固定的和/或非特异性结合的分析物的同时轻松获得高质量和高重复性的数据。

       通过Tracedrawer软件只需一步设置,选定参照曲线,点击确定,即可轻松扣除背景;之后拟合获得完整精确的动力学参数:Ka、kd、KD。
 

Nicoya OpenSPR分子互作仪在研究蛋白-蛋白间相互作用的优势
 

• 操作简单---1小时即可掌控;

• 完整动力学参数检测---Ka,Kd,KD;

• 高效率---上样、出结果,一键式分析,10min出结果,1-2h出完整动力学检测结果;

• 高精准---检测不受温度、缓冲液折射率影响;

• 无需专用校正通道---可忽略的bulk效应;

• 实时Co-IP 检测---2小时出检测结果,无需转膜及电泳;

 

来源:普瑞麦迪(北京)实验室技术有限公司
联系电话:4006-813-863
E-mail:hzhang@premedlab.com

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