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玉米内源基因核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法SN标准)使用说明书
点击次数:1111 发布日期:2018-7-11  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负

玉米内源基因核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法SN标准)

产品说明

转基因检测系列可针对食品、饲料等样品中转基因成分的特异核酸片段进行扩增,通过实时扩增曲线判定结果。本产品用于玉米成分的检测,检出限为0.1%

 产品组成( 48测试)

042012M

试剂

含量

A-ZEIN-P

1000μL × 1支

NG-P

 100μL × 1支

PG-ZEIN-P

 100μL × 1支

适用仪器

   荧光PCR仪(ABI 7500,CFX 96,Mx 3005P,LineGene9600)等PCR扩增仪。

 自备耗材和仪器

    ①灭菌1.5mL或2.0mL离心管;②灭菌0.2mL PCR管或八联管;③冰盒;④移液器(11-10μL,10-100μL,100-1000μL)及配套灭菌吸头;⑤离心机;⑥涡旋混匀器;⑦金属浴;⑧均质机、搅拌机或研钵等研磨器具;⑨电子天平。

 注意事项

1.本试剂检测灵敏度高。为了防止污染,实验要分区操作。

   1)第一区:试剂准备区。

   2)第二区:样本制备区。

   3)第三区:扩增及产物分析区。

   ★ 分区之间最好进行物理性隔离,避免人为因素造成的污染。

2. 实验过程中穿戴工作服和乳胶手套,使用移液器,试验产生的所有废弃物及时处理。

3.严格按照操作步骤操作,试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰上操作。

4.反应液中的成分对光敏感,应避光保存。试剂使用前要完全解冻,但应避免反复冻融,推荐使用前离心30秒,并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。

5.反应结束后,扩增管请置于密封袋内丢弃,当日清理,开盖易造成气溶胶污染,禁止开盖。

6.不同批号试剂请勿混合使用,在有效期内使用。

 样品处理

参照《GB/T 19495.3-2004 转基因产品检测 核酸提取纯化方法》或其他标准处理样品,制备的样本保存待用。

详细步骤请按照标准操作或查阅食安通软件。

 实验操作

将试剂完全解冻,各组分离心30s。

1. 试剂配制(试剂准备区,放置于冰盒中进行):

若有N个待检样品,则参照下表,按照N+2个数量计算反应液用量(N个待检样品+1个阴性对照+1个阳性对照),涡旋混匀,离心30s,分装于0.2mL PCR管中。

试剂

使用量

A-ZEIN-P

20×(N+2)μL

反应液总体积

20×(N+2)μL

  1. 模板制备(样本制备区)

建议使用配套植物基因组DNA提取系列产品,具体过程详见产品说明书。

3.添加模板(样本制备区,放置于冰盒中进行)

    在步骤1中已含有反应液的PCR管中分别加入5μL模板,顺序为NG-P、待测样品模板、PG-ZEIN-P。涡旋混匀30s,离心1min,立即进行PCR扩增反应。

4. 扩增反应(扩增及产物分析区)

使用荧光定量PCR仪,荧光基团选择FAM,淬灭基团选择TAMRA。

按下列条件设置扩增反应:

PCR循环

荧光收集位点

  95℃  

10分钟

1个循环

  95℃   

15秒

40个循环

  60℃   

1分钟

6.基线和阈值设定

基线调整取3-15个循环的荧光信号,阈值线应超过阴性对照扩增曲线的最高点。

 结果判定

检测样品无Ct值,曲线为直线或轻微斜线,无“S”型扩增曲线,可报告样品阴性,不含有玉米成分或含量低于检测限;

检测样品Ct≤36,曲线呈“S”型扩增曲线,可直接报告样品阳性,含有玉米成分;

检测样品36

NG反应为平滑直线,PG反应为“S”型扩增曲线,此次检测结果有效,否则无效。如重复检测结果仍为无效,请与技术支持人员联系。

来源:上海一基实业有限公司
联系电话:021-61119791
E-mail:2851717098@qq.com

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