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昊诺斯第17期分享讨论:研磨提取核酸、微生物
点击次数:2100 发布日期:2016-12-5  来源:本站 本站原创,转载请注明出处
第17期分享讨论:小鼠内脏组织样品研磨提取核酸、微生物(文末有彩蛋)
 
 
本周昊诺斯第17期组织研磨和样品处理分享、讨论,我们邀请到了实验动物监测所袁老师给大家分享,内容是——小鼠内脏组织样品研磨提取核酸、微生物。

那接下来,就让我们先睹为快,看看这个案例的情况。
 
实例1:加裂解液直接匀浆(使用Trizol提取组织RNA)
1、取适量组织装入离心管,组织尽量剪碎成小块;
2、在离心管中加入氧化锆珠数颗(一次性使用);
3、先加入Trizol(不建议加入太多 Trizol,液体体积过大影响匀浆效果),盖好管盖,装入鼎昊源TL2020组织研磨仪适配器中,安装上机。
4、组织研磨仪研磨参数设置为一定转速,研磨时间为2~5min(不同组织研磨时间不同,脑1min,肝脏、脾脏和肾脏2min、肺脏比较难研磨需3~5min,可能更长,中间应停顿1~2次防止温度过高,研磨前最好先用液氮或放置在-80度冰箱预冷);
5、再加入适量Trizol至总体积;
6、后面步骤按Trizol说明进行。
 
实例2:先匀浆,再取一定量液体加裂解液进行核酸抽提,本protocol适用提取小鼠组织中的病毒的核酸
1、取适量组织装入离心管,组织尽量剪碎成小块,样品量较多时使用大离心管;
2、在离心管中加入氧化锆珠数颗,使用大离心管时,可以将氧化锆珠数量增加;
3、加入适量的灭菌PBS或生理盐水,总体积为离心管单管体积的1/3~1/2为好,盖好管盖,装入鼎昊源TL2020组织研磨仪适配器中,安装上机(研磨前最好先用液氮或放置在-80度冰箱预冷)。
4、组织研磨仪研磨参数设置为一定转速,研磨时间为1~5min(不同组织研磨时间不同,脑1min,肝脏、脾脏和肾脏2min、肺脏比较难研磨需3~5min,可能更长,中间应停顿1~2次防止温度过高),若研磨不充分,可以继续研磨到充分为止;
5、一定温度、转速,离心数分钟;
6、取上清液按照试剂盒说明书进行后续提取步骤。
实验1中,我们之前试过一齐加1ml的Trizol,可能是体积过大,反而匀浆效果不好,所以就改成先加一部分裂解先匀浆,然后再补齐1ml体积。
 
昊诺斯嘉宾实验1中,我们之前试过一齐加1ml的Trizol,可能是体积过大,反而匀浆效果不好,所以就改成先加一部分裂解先匀浆,然后再补齐1ml体积。
 
昊诺斯嘉宾:如果前面匀浆充分了,后面补齐裂解后不需要再研磨的,只需稍微混匀就可以。
 
用户可以选择干磨吗?就组织直接扔进去弄成匀浆或者粉末,我再根据需要加trizol或者蛋白裂解液
 
昊诺斯嘉宾跟大家分享下,我们最近用组织研磨仪用于抗原加佐剂的乳化,效果还不错。一机两用。
 
昊诺斯嘉宾组织干磨效果不好,需要加入适量的液体,没有液体很多组织挂在壁上。
 
用户提取下的核酸用途是什么?这个是我最关心的。
 
昊诺斯嘉宾我们用于病原微生物检测。
 
用户怎么个检测法您能给我简单介绍一下吗?
 
昊诺斯嘉宾所以我们用的最多的是实验2,先匀浆,破碎组织,释放组织细胞中的病毒,。
 
昊诺斯嘉宾主要采用PCR为基础的分子生物学检测。
 
用户嗯,PCR,我知道了,谢谢。
 
昊诺斯嘉宾不客气。一般的组织核酸抽提试剂盒中,都会有一部匀浆的步骤。
 
昊诺斯嘉宾以前没有研磨仪的时候都是用研钵手工匀浆,一天几十上百个样品,累成狗。
 
用户研磨如果用液氮处理,里面的液体不会冻住吗?
 
用户我也有这个疑问,看来这个仪器是核酸分析必须的。
 
昊诺斯嘉宾开始会冻住,等研磨到一定时间就自然解冻了,我们处理时只是让它预冷一下,最好不要冻住。所以一般是放在-80度冰箱稍预冷一下就可以了
 
用户嗯!
 
用户谢谢
 
昊诺斯嘉宾是的,核酸检测必备。
 
用户早些天我看一个打沙棘的视频,冻掉以后,直接就打下来了,所以冷冻还是有效果的,原理是一样的。
 
昊诺斯嘉宾还要讲一下,选质量好的EP管,现在一些国产的EP管质量太差,盖不严,导致液体漏出。如果预冷的话,一些EP管就可能被打碎了,我们有过这样的例子。
 
用户我们也因为质量不好的EP管影响过实验,所以试剂耗材也很重要。
 
昊诺斯嘉宾同意。
 
用户一定要选择质量有保证的产品。
 
昊诺斯嘉宾是啊。关于振动频率说明一下,我们选的频率比较高,我看到有的资料上讲一般动物样品如大脑、心脏、肺、胃、肝脏等无骨骼组织的研磨推荐频率是1000-1100r/min研磨时间是1-2min,具体的频率可根据样品材料及数量的不同,做适当的调整。过大的频率或者时间都可能会导致部分DNA的断裂,建议每次研磨时间在1mm左右,中间停顿一会,重复2-3次。
 
用户谢谢袁老师。
 
 
最后,让我们共同期待第18期“组织研磨和样品处理分享、讨论”活动吧!下期,我们不见不散!
 
温馨提示
我们的“组织研磨和样品处理分享、讨论”活动是在【昊诺斯鼎昊源组织研磨分享】微信群内开展的!如果您也想参与我们的活动,那么就扫描下方二维码,关注昊诺斯,回复“加群”,群主则会拉您进群。
 
 
本群的目的是希望可以给大家提供一个样品处理问题的交流平台,有什么相关问题在群里能够分享和提问答疑……另外我们还能通过这个平台连接用户使用人员和工厂研发人员,看看在这些讨论过程中是否会碰撞出火花来,以为实验室手工的样品处理做出更多更好的自动化的辅助工具或替代仪器备来,更可以为完善我们现有产品的设计打开思路提出建议……
 
 
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