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昊诺斯第十期“组织研磨和样品处理分享、讨论”
点击次数:3639 发布日期:2016-7-27  来源:本站 本站原创,转载请注明出处

【干货分享】昊诺斯第十期“组织研磨和样品处理分享、讨论” 

这一期我们有幸请到了昊诺斯老用户吕博士,给大家做实验室样品处理分享。

吕博士实验经验丰富,在样品处理方面有很多心得,在本期的组织研磨和样品处理分享、讨论中给大家带来了非常精彩的分享,并受到了大家的一致赞赏,其他老师们也都热情高涨,积极参与组织研磨和样品处理分享、讨论。

 
那接下来,就让我们一看究竟吧!
 
 
昊诺斯嘉宾:怎么分享呢?就是用那个组织研磨仪,DNA、RNA都做过,感觉整体效率肯定是上去了,质量也不错吧,大家有啥问题,提问,然后我来针对性地说一下我的使用感受吧。
 
昊诺斯嘉宾:简单说来,就是一个2ml离心管里面,放大小两个钢珠,然后把样放进去,根据样的情况决定是否剪碎,然后放到液氮里面冻到不起泡,小心放到组织研磨仪带的槽子里面,尽量对称,然后打磨1-2min,根据样的情况,决定是否再次在液氮里面冻,然后是否再次打样。
 
用户:提取RNA用的是什么产品?
 
昊诺斯嘉宾:什么意思?
 
用户:用Trizol还是商业化试剂盒?
 
昊诺斯嘉宾:就是三无的好一点的离心管,然后Trizol,钢珠用全新的,然后在无水乙醇里面泡,然后150度烘箱1-2小时,RNA稍微小心点,我们的效果还是不错的,没有想象中的那么难弄。一般我们RNA提取加纯化差不多一次40-80个样吧,除了前面钢珠和离心管要求高点,其他的和DNA差不多。
 
用户:吕老师您主要做的是什么样品呢?
 
昊诺斯嘉宾:我们做植物,小麦。小麦嫩叶不用剪,直接一段放进去就可以,地里采集的老叶子尽量能够剪一下。
 
用户:不用液氮可以不?
 
昊诺斯嘉宾:老叶子纤维比较多且粗壮,不用液氮貌似不行吧,目前我还不清楚不用液氮的方法。如果不用液氮估计会被组织研磨仪打磨成样泥……,这个可以咨询下鼎昊源的技术。
 
用户:液氮效果好。
 
昊诺斯嘉宾:还有自动凝胶染色的问题我也可以和大家分享,尤其是RNA,用液氮可以尽量防止RNase的作用,或许也可以Trizol加进去,不用液氮也可以吧,不过我没那么做过。
 
用户:液氮升华水分。
 
昊诺斯嘉宾:关于钢珠的问题,我个人感觉一大一小最好,两个大的如果转数调整不当,管子质量不好容易把管子打裂。
 
用户:我想问下大家是用液氮冻下,组织研磨仪研磨后的研磨粉末再浸提吗?
 
昊诺斯嘉宾:我的程序是DNA,管子先放钢珠,然后放样,然后盖盖,然后液氮冻,然后快速拿出放到槽子里,打样,根据样的情况和自己设定的转速第一次打磨时间可以决定是否进行再次冻再次打。个人建议一批样品冻两次打两次,每次差不多1min半,我们小麦老叶子效果不错,就是转槽子的内径里面的个别样可能打的不好,毕竟应该是里面离心力小点,然后挑出来再次打样就OK了。
 
昊诺斯嘉宾:大家都还有啥问题,互相交流下……
 
用户:打老叶子的时候您组织研磨仪一般调多大的转速呢?
 
昊诺斯嘉宾:组织研磨仪转速1500吧,这个还要根据管子的质量来。
 
用户:管子质量好点的可以提升组织研磨仪转速是吗?
 
昊诺斯嘉宾:DNA用的韧性好的一般的管子,组织研磨仪转速高,RNA用的韧性稍微差点的三无管子,组织研磨仪转数低,组织研磨仪转数和时间应该在一定程度上成反比吧,还有钢珠的大小,两个小钢珠时间长,组织研磨仪转数可以适当提高,两个大钢珠所需时间短,组织研磨仪转速不要太高,一般我RNA应该是QSP的管子,不知道哪个批次,组织研磨仪用的是1000转吧。
 
昊诺斯嘉宾:有一次组织研磨仪用转速高了打裂了,样废了,之后组织研磨仪就不敢用高转速了,宁愿延长点时间。
 
昊诺斯嘉宾:对啦,我不是老师哈,现在博士在读……大家互相交流。
 
昊诺斯嘉宾:我们的组织研磨仪买了好几年了,不知道现在的有没有控温的,如果有控温的组织研磨仪效果应该会更好。
 
用户:我们实验室有个新的组织研磨仪,管子没有配套,还没有使用,植物用手磨。
 
昊诺斯嘉宾:无所谓吧,我们的管子就是用普通2ml的EP管呀。
 
用户:控温的组织研磨仪最低达多少度?
 
昊诺斯嘉宾:控温的组织研磨仪也不可能达到液氮的温度吧,我的意思是如果有个控温的组织研磨仪,能够保持在0度以下就好,然后这样一次就可以打样时间长点。
 
用户:是的。
 
用户:嗯,确实不错,我上次做的感觉有抑制剂,PCR效果不行。
 
用户:组织研磨仪周围放上冰袋,是不是能适度降降温?
 
用户:是因为常温研磨的不?
 
用户:植物叶片相对好研磨。
 
用户:见过吹液氮冷却的,能达到-20/30。
 
用户:冰浴。
 
昊诺斯嘉宾:动物组织适当剪碎。
 
昊诺斯:控温功能的组织研磨仪机型正在研制中,等出来了给你试用,怎么样吕老师。
 
用户:温度过低的话对组织研磨仪不会有影响么?
 
昊诺斯嘉宾:肯定会。
 
用户:有这个必要。
 
昊诺斯嘉宾:所以我建议组织研磨仪温度能够控制在0度之下即可。
 
用户:温度对效果的影响还是很大的。
 
昊诺斯嘉宾:毕竟金属在很低温度下应该相对强度会降低吧。
 
用户:我们是用冰袋。
 
用户:嗯,我们实验室一般也都用冰袋降温。
 
用户:固体二氧化碳更好吧。
 
用户:成本高点。
 
昊诺斯嘉宾:液氮冻过,然后一次打样时间不要太长,让样品处于没有溶的状态效果也可以呀。
 
昊诺斯嘉宾:之所以说控温,是嫌重复在液氮中冻麻烦,目前我们做实验还没有影响效果的。
 
用户:液氮一定要干嘛, 液氮冻的不能有液体,样品没有溶。
 
昊诺斯嘉宾:温控应该能够提高打样效率。
 
用户:干冰没用过,话说干冰是不是很贵?
 
昊诺斯嘉宾:最迟样品不要有水。
 
用户:有液体也升华了。
 
昊诺斯嘉宾:你是什么样品呢?有液体会冻住,然后很难打好,经验是这样。
 
用户:植物叶片。
 
昊诺斯嘉宾:如果里面有液氮没关系。
 
用户:嗯,样品要清洗。
 
昊诺斯嘉宾:不要有水,样品也不要堆地太紧。
 
昊诺斯嘉宾:我们有时样品先放在-80,取出剪样的时候会有一点水,但是好像没影响效果吧。
 
用户:是专门的液氮罐里存放吗?
 
昊诺斯嘉宾:没有呀,直接放到-80冰箱里了。
 
用户:我们冰箱一般只设18零下。
 
昊诺斯嘉宾:有专门的-80冰箱,普通冰箱是-20吧,具体这个我也不是很清楚。
 
用户:您一般是提取小麦叶片酶吗?
 
昊诺斯嘉宾:DNA、RNA。
 
用户:什么是剪样?
 
用户:叶片用剪刀剪碎。
 
昊诺斯嘉宾:比如小麦叶片,稍微剪碎一下。
 
用户:哦,是这样的啊。
 
用户:如果没在-80存放会不会影响植物DNA提取,就是样品吧。
 
用户:可不可以用普通的粉碎机先粉碎啊?
 
用户:植物DNA提取需要新鲜样吗?
 
用户:我觉得如果是提dna应该问题不大,但如果是提rna就必须用液氮。
 
用户:样品多的话粉碎,不多就剪下就好。
 
用户:但如果是提取rna的话,普通研磨仪可以吗?
 
昊诺斯嘉宾:可以呀,反正我的是这样。
 
用户:rna提取条件更为严格?
 
用户:dna和rna的提取有什么不同吗?
 
昊诺斯嘉宾:RNA操作要严格些。
 
用户:rna酶存在较多,rna易降解。
 
用户:需要查下资料看看怎么提取,我们目前提取一些酶。
 
用户:所以我们一般rna提取时样品都要用液氮。
 
用户:保证酶不失活?
 
用户:对。
 
用户:而且二者会不会产生干扰啊?
 
用户:这里吐槽一下:每次从-80冰箱里找样本都得在一大堆东西里翻半天,#公用设施的天然缺点#。
 
用户:实验室的管理,人多嘛用的东西多,有时自己需要的也要找好久。
 
用户:总有人不按套路来。
 
用户:这也正常,大家互相监督理解。
 
用户:每打一次样品是不是换钢珠或清洗,大批量的植物研磨吕老师有什么建议吗?
 
昊诺斯嘉宾:我们实验室每次提RNA用新钢珠,DNA钢珠重复用,用稀乙酸先洗一遍,然后用无水乙醇一泡,然后晾干……DNA我们每次最少都是2.300个,最多一天三个人提过大于800吧,RNA一般一天提几十个吧,包括纯化,一般一个人或者两个人,RNA尽量各个环节都少点引入污染的可能。
 
用户:感谢分享!
 
昊诺斯:谢谢吕博士!
 
用户:谢谢!
 
用户:谢谢分享!
 
最后,再次感谢昊诺斯特邀嘉宾吕博士的精彩分享,让大家都颇有收获。让我们共同期待第十一期“组织研磨和样品处理分享、讨论”活动吧!下期,我们不见不散!
 
 
温馨提示:
我们的“组织研磨和样品处理分享、讨论”活动是在【昊诺斯鼎昊源组织研磨分享】微信群内开展的!如果您也想参与我们的活动,那么就找昊诺斯销售工程师拉您进群,或者回复昊诺斯微信公众号申请进群(申请时要注明所在单位名称+微信号)。
 
此外,本群的目的是希望可以给大家提供一个样品处理问题的交流平台,有什么相关问题在群里能够分享和提问答疑……另外我们还能通过这个平台连接用户使用人员和工厂研发人员,看看在这些讨论过程中是否会碰撞出火花来,以为实验室手工的样品处理做出更多更好的自动化的辅助工具或替代仪器备来,更可以为完善我们现有产品的设计打开思路提出建议……
 
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