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德国IKA推出蛋白质免疫印迹套装“姐妹花”工具包
点击次数:3335 发布日期:2017-1-4  来源:本站 本站原创,转载请注明出处
Western Blot所需要的工具包,就在这里
——德国IKA蛋白质免疫印迹套装“姐妹花”

自1979年发明以来,Western Blot(WB)已成为生命科学领域最常用的研究方法之一,它是一种公认的、基于构建抗体-蛋白质复合物的蛋白质检测与分析技术。今天,请各位随小编一探WB的奇妙世界,我们来一起分析它最让我们“纠结”的操作点,并找出解决方法!

首先,一个经典的WB流程长成这样——


其次,我们在做WB时最常遇到的问题也是惊人的相似——样品漂浮、蛋白条带扭曲(无法准确判断蛋白分子量)、转膜后看不到带蓝色或橙色的指示条带、抗体孵育不均匀导致曝光度差异很大(依然是会影响到蛋白表达量的估算)。
 
这些问题其实都或多或少与样品前处理有关。也就是说,我们完全可以通过优化样品处理手法,以及经验累积,来获得完美的WB结果。

表1:Western Blot常见问题分析
常见问题
原因分析
解决方法
样品漂浮
样品中含有未除净的溶剂或杂质,其密度比电泳缓冲液小
处理组织或菌体时,需充分分散或裂解,确保目的蛋白尽可能的释放;
热处理粗样时,确保升温迅速,并且金属浴或水温的实际温度达到100℃(在海拔较高处水的沸腾不能确保温度);
离心的转速和时间足够;
吸取上清液时尽量不要碰到中间层
 
蛋白条带扭曲
分离胶的浓度与蛋白分子量不对应;灌胶时间过长或过短,导致丙烯酰胺的交联度不均匀
根据目的蛋白的分子量选择正确的分离胶浓度;
制备分离胶与浓缩胶时,应保证缓冲液母液的正确稀释,以及各组分的充分混匀(仅用移液器吹吸是不够的,最好可以迅速用磁力搅拌器进行混匀)
 
转膜后没有指示条带
如果此时SDS-PAGE胶上也没有指示剂,则表明转膜时间过长,蛋白穿膜(此时就没有再继续做下去的必要了)
注意控制转膜时间;
电泳液反复使用也可能导致转膜失败
抗体孵育不均匀
孵育时振荡摇床转速过快,或是混匀直径不够,导致孵育不充分或不均匀
确保摇床可以在50 rpm稳定运行;
选择振荡直径在5~10 mm范围内的摇床
 

德国IKA为您提供“姐妹花”版本的蛋白质免疫印迹套装,为广大生命科学工作者提供最适合您操作习惯的产品组合:

表2:德国IKA蛋白质免疫印迹套装(产品详情请见www.ika.cn



表2中的产品简介如下,德国品质,始终如一,值得您信赖——
* T10 标准型套装:高速均质机,用于分散组织于缓冲液,可选配一次性分散头,避免反复清洁导致的交叉污染
* DBH 1:金属浴,用于迅速升温的加热反应,标配PT 1000.60温度传感器,可准确测量温度并在大数显屏上显示,方便同时观察设定温度和实际温度,带有计时功能
* ICC basic eco 18:恒温水浴,二元一体泵可确保极佳的升温速率和温度均一性,透明浴槽方便观察,智能的高、低液位报警方便日常操作
* Vortex 2:涡旋振荡器,用于剧烈混匀,可选配多种夹具,持久耐用,并可在振荡多个EP管、试管时解放您的双手,机身坚固稳定,避免移动产生撞击风险
* KS 260基本型:振荡摇床,混匀直径10 mm,实际工作转速范围50 – 500 rpm,在低转速下可长时间稳定运行,完全满足生命科学实验室的多种振荡需求,可灵活选配多种夹具

如有任何疑问,欢迎您随时联系德国IKA应用中心:+86 (20)8222 6771   或applicationsupport@ika.cn 
发布者:德国IKA集团/艾卡(广州)仪器设备有限公司
联系电话:020-82226771
E-mail:eric.zhang@ika.cn


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